凍干樣品的保存期與樣品的含水量也就是水分含量有顯著的關(guān)系，含水量越高，反應(yīng)越劇烈，保存期越短，越容易發(fā)生變性，水解氧化等各種反應(yīng)。因此控制凍干樣品的含水量非常關(guān)鍵，測(cè)定含水量是嚴(yán)重我們凍干工藝的一個(gè)重要手段。測(cè)試含水量的方法有：費(fèi)休氏法、加熱失重法、減壓干燥法等。其中基于費(fèi)休氏法的方法包括容量滴定法和庫(kù)倫滴定法。IVD凍干樣品由于樣品含量比較少，大部分都是微升級(jí)別，適合費(fèi)休氏法。制藥行業(yè)凍干樣品測(cè)量含水量相對(duì)精準(zhǔn)也是采用此法。
引用藥典中的容量滴定法。
本法是根據(jù)碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中與水定量反應(yīng)的原理來(lái)測(cè)定水分。所用儀器應(yīng)干燥，并能避免空氣中水分的侵入；測(cè)定應(yīng)在干燥處進(jìn)行。
費(fèi)休氏試液的制備與標(biāo)定
?。?/span>1）制備 稱取碘（置硫酸干燥器內(nèi)48小時(shí)以上）110g，置干燥的具塞錐形瓶（或燒瓶）中，加無(wú)水吡啶160ml，注意冷卻，振搖至碘全部溶解，加無(wú)水甲醇300ml，稱定重量，將錐形瓶（或燒瓶）置冰浴中冷卻，在避免空氣中水分侵入的條件下，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加無(wú)水甲醇使成1000ml，密塞，搖勻，在暗處放置24小時(shí)。
也可以使用穩(wěn)定的市售費(fèi)休氏試液。市售的費(fèi)休氏試液可以是不含吡啶的其他堿化試劑，或不含甲醇的其他伯醇類等制成；也可以是單一的溶液或由兩種溶液臨用前混合而成。
本試液應(yīng)遮光，密封，陰涼干燥處保存。臨用前應(yīng)標(biāo)定滴定度。
?。?/span>2）標(biāo)定 精密稱取純化水10～30mg，用水分測(cè)定儀直接標(biāo)定；或精密稱取純化水10～30mg，置干燥的具塞錐形瓶中，除另有規(guī)定外，加無(wú)水甲醇適量，在避免空氣中水分侵入的條件下，用費(fèi)休氏試液滴定至溶液由淺黃色變?yōu)榧t棕色，或用電化學(xué)方法［如永停滴定法（通則0701）等］指示終點(diǎn)；另做空白試驗(yàn)，按下式計(jì)算：
F=W/(A-B)
式中 F為每1ml費(fèi)休氏試液相當(dāng)于水的重量，mg；
W為稱取純化水的重量，mg；
A為滴定所消耗費(fèi)休氏試液的容積，ml；
B為空白所消耗費(fèi)休氏試液的容積，ml。
測(cè)定法 精密稱取供試品適量（約消耗費(fèi)休氏試液1～5ml），除另有規(guī)定外，溶劑為無(wú)水甲醇，用水分測(cè)定儀直接測(cè)定?；蚓芊Q取供試品適量，置干燥的具塞錐形瓶中，加溶劑適量，在不斷振搖（或攪拌）下用費(fèi)休氏試液滴定至溶液由淺黃色變?yōu)榧t棕色，或用永停滴定法（通則0701）指示終點(diǎn)；另做空白試驗(yàn)，按下式計(jì)算：
供試品水分含量（%）=（A-B)*F/W*100%
式中 A為供試品所消耗費(fèi)休氏試液的體積，ml；
B為空白所消耗費(fèi)休氏試液的體積，ml；
F為每1ml費(fèi)休氏試液相當(dāng)于水的重量，mg；
W為供試品的重量，mg。
如供試品吸濕性較強(qiáng)，可稱取供試品適量置干燥的容器中，密封（可在干燥的隔離箱中操作），精密稱定，用干燥的注射器注入適量無(wú)水甲醇或其他適宜溶劑，精密稱定總重量，振搖使供試品溶解，測(cè)定該溶液水分。洗凈并烘干容器，精密稱定其重量。同時(shí)測(cè)定溶劑的水分。按下式計(jì)算：
供試品水分含量（%）=[(W1-W3)c1-(W1-W2)c2]/(W2-W3)*100%
式中 W1為供試品、溶劑和容器的重量，g；
W2為供試品、容器的重量，g；
W3為容器的重量，g；
c1為供試品溶液的水分含量，g/g；
c2為溶劑的水分含量，g/g。
對(duì)熱穩(wěn)定的供試品，亦可將水分測(cè)定儀和市售卡氏干燥爐聯(lián)用測(cè)定水分。即將一定量的供試品在干燥爐或樣品瓶中加熱，并用干燥氣體將蒸發(fā)出的水分導(dǎo)入水分測(cè)定儀中測(cè)定。
